腸道病毒所致各系統(tǒng)感染檢查
一、檢查：
1.周圍血象 白細(xì)胞計(jì)數(shù)大多正常，在某些腸道病毒感染時(shí)可增高，中性粒細(xì)胞也可增多。
2.病毒分離 一般都采取咽拭及糞便作病毒分離和檢定，尚可從病人的腦脊液、胸水、心包積液、血液、皰漿以及活檢或尸檢取得的組織中分離到病毒。標(biāo)本取得后，應(yīng)立即送檢。可接種于猴腎、人胚腎、人羊膜、人二倍體或Hela細(xì)胞、KB傳代細(xì)胞中進(jìn)行組織培養(yǎng)，觀察細(xì)胞病變。同時(shí)用多種組織培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行分離可提高陽(yáng)性率。陽(yáng)性標(biāo)本再以特異型的免疫血清作中和試驗(yàn)進(jìn)行型別鑒定。疑有柯薩奇A組病毒感染者，應(yīng)將標(biāo)本經(jīng)皮下、腹腔內(nèi)或腦內(nèi)途徑接種乳鼠進(jìn)行病毒分離，因其組織培養(yǎng)陽(yáng)性率不高。柯薩奇B組病毒亦可使乳鼠致病。
3.血清免疫學(xué)試驗(yàn) 采取雙份血清，測(cè)定型特異抗體水平。一般可用中和試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA，酶標(biāo)法）、放射免疫等法進(jìn)行測(cè)定，其中以中和試驗(yàn)最為可靠，中和抗體消失最慢，型特異性也較強(qiáng)。如恢復(fù)期抗體水平比早期有≥4倍上升，則有極大的診斷意義。但因腸道病毒型別眾多，血清學(xué)中和試驗(yàn)工作量大，只有當(dāng)某地一已知型腸道病毒流行時(shí)，以此法進(jìn)行診斷比較理想。
4.免疫熒光快速診斷法 以熒光染色的免疫抗體來(lái)鑒定抗原可達(dá)到快速診斷的目的。但目前除在脊髓灰質(zhì)炎病毒感染時(shí)應(yīng)用外，在腸道病毒感染時(shí)采用不多，因需備各種型特異的免疫血清，手續(xù)繁多。最近采用許多血清型共有的VP3-ZC抗原和一種與多血清型的VP1衣殼蛋白交叉反應(yīng)的單克隆抗體，改進(jìn)了免疫診斷方法，但目前仍停留于研究階段。
5.核酸雜交法 由于不同血清型的腸道病毒基因組間存在同源性，特別是5′端非編碼區(qū)部分區(qū)域高度保守，故可供核酸雜交，使近年來(lái)對(duì)腸道病毒鑒定有了新的飛躍。采用探針有以下三種：①cDNA探針，以病毒RNA某一片段為模板，由逆轉(zhuǎn)錄酶催化產(chǎn)生，大多克隆在質(zhì)粒載體中，再把帶有顯色基因（生物素或地高辛）或同位素的核苷酸摻入到新合成的cDNA鏈中去，加以標(biāo)記，若將標(biāo)本先經(jīng)12～24小時(shí)組織培養(yǎng)可提高陽(yáng)性率。②RNA探針-由于RNA是單鏈分子，故它與靶序列的雜交反應(yīng)效率極高，一般用特異的轉(zhuǎn)錄載體克隆腸道病毒RNA探針，混合幾種RNA探針可使檢測(cè)病毒型更廣，RNA探針在特異性和敏感性方面都優(yōu)于cDNA探針。③寡核苷酸探針，較上述二種探針有下面優(yōu)點(diǎn)。因其鏈短，與等量靶位點(diǎn)完全雜交時(shí)間短，且可識(shí)別靶序列內(nèi)一個(gè)堿基的變化，可檢測(cè)點(diǎn)突變，又可大量合成，價(jià)廉。此探針因選擇5′端非編碼區(qū)共同序列，故可牢固而特異地同大多數(shù)臨床常見腸道病毒結(jié)合。為了克服標(biāo)本中腸道病毒滴度太低的難題，近年采用PCR法將單一基因或短DNA序列放大，再與探針雜交，此法已應(yīng)用于臨床。在腸道病毒中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染流行時(shí)，從腦脊液中檢測(cè)腸道病毒RNA，陽(yáng)性率高，可在24小時(shí)內(nèi)得結(jié)果，比病毒培養(yǎng)平均需6～8天快得多。臨床標(biāo)本用PCR擴(kuò)增后，再與非同位素標(biāo)記腸道病毒探針雜交，數(shù)小時(shí)即有結(jié)果，大大有助于臨床確診。
